Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

Antibiyotik İnhibisyon Bölgesi Nedir ? İnhibisyon Nasıl Ölçülür?

---

İnhibisyon bölgesi, disk difüzyon yöntemi yardımı ile bulunmuştur. Busayfada, inhibisyon bölgesini etkileyebilecek farklı parametrelere ilişkin tanımın yanı sıra sizlere bilgi aktarılacaktır.

Amerika'da antibiyotik direnci nedeniyle yılda 23.000 ölüm vakası oluşmektadır. Clostridium difficile enfeksiyonları her yıl yaklaşık 14.000 ölüme neden olur!

Paul Ehrlich, 1907 yılının başında frengi tedavisi için arsrphenamine kullanılan bir antibakteriyel ajan kullandığında tıp alanında devrim yaratmıştır. 1928'de Alexander Fleming, harika ilaç penisilini keşfetti. Bugün bir takım antibiyotikler biliniyor. Bununla birlikte, antibiyotiklerin ayrımsız ve dikkatsiz kullanılması nedeniyle birçok bakteri mevcut antibiyotiğin çoğuna karşı direnç geliştirmiştir.

İnhibisyon bölgesi belirli bir bakterinin belirli bir antimikrobik maddenin etkisine duyarlı olup olmadığını belirlemek için kullanılır; Bu, hekime nispeten daha kısa sürede daha etkili bir tedavi rotası seçmesine yardımcı olabilir. Aynı zamanda, bileşiğin antimikrobiyal etkinliği olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir.

İnhibisyon Bölgesi Tanımı

Bir organizmanın antimikrobiyal ajanlara duyarlılığının test edilmesi genellikle agar difüzyonu veya disk difüzyon testi kullanılarak yapılır. Bu testin parametreleri bilim adamları W. M. M. Kirby ve A.W. Bauer tarafından belirtildi (veya standartlaştırıldı) ve ayrıca Kirby-Bauer antibiyotik testi olarak da ifade edildi. Bu yöntemde, antibiyotikler belirli bir kağıt türünün üzerine emprenye edilir ve ilgilenilen bakteri içeren agarın yüzeyine yerleştirilir. Bu, antimikrobik maddenin çevreleyen ortama difüzyonuyla sonuçlanır.

Bakteri belirli antibiyotiklere duyarlıysa, hiçbir büyüme gözlenmez. Bununla birlikte, antibiyotik daha da yayılır, konsantrasyonu azalır. Belirli bir noktadan sonra, konsantrasyonu çok düşük olduğundan artık bakteri büyümesini engelleyemez. Dolayısıyla, çevreleyen bakterinin yoğun bir şek,lde büyümesine karşı (çimenler) temizlenecek disklerin etrafında bir alan vardır, bu temizleme alanı inhibisyon bölgesi olarak tanımlanır.

İnhibisyon bölgesinin çapı antibiyotik etkinliğini belirleyecektir; Çap ne kadar büyük olursa bakterinin antibiyotik duyarlılığı o kadar artar. Bölge boyutları, bakterinin hassas, dirençli veya bu antibiyotiğe orta derecede hassas olup olmadığını belirlemek için standart bir grafikle karşılaştırılır.

İnhibisyon Bölgesi Nasıl Bulunur?

İnhibisyon bölgesi bulmak için disk difüzyon yöntemi izlenir.

● Bu yöntemde, saf bakteri kültürü bir steril Mueller-Hinton agar plakasına sürülür.

● Ardından test edilecek antibiyotik ile emprenye edilmiş bir disk yerleştirilir. Antibiyotik, agarın yüzeyi ile temas ettiği anda ortama yayılır (forseps veya çok diskli bir dağıtıcı kullanarak).

● Disk ortam üzerine konulduktan sonra, daha belirgin bölgeler elde etmek için bu kurulum yarım saat soğutulur (daha düşük sıcaklık, bakterinin büyümesini engeller, ancak antibiyotiğin difüzyonunu etkilemez).

● Bundan sonra kurulum, bakteri üremesi için en uygun sıcaklıkta 16-18 saat inkübe edilir.
İnhibisyon Bölgesi Nasıl Ölçülür?
● Engelleme bölgesi bir cetvel, bir çift kaliper veya bir şablon yardımı ile ölçülür. Boyutu milimetre olarak ölçülür ve genellikle en yakın milimetreye yuvarlanır. Diskin çapı da bu işleme dahildir.

● Bu ölçümler herhangi bir enstrüman yardımı olmadan çıplak gözle yapılır. Çapın ölçümü plakanın arka tarafından yapılır. Çap ölçümü, plakalar koyu bir arka zemin üzerine tutularak yapılır.
● Ölçümlerdeki hataları en aza indirgemek için bu plakalar doğrudan yukarıdan bakılmalıdır.

● Çalkantılı motilite gösteren organizmalar durumunda, inhibisyon bölgesine giren organizmaların örtülerini ihmal edin.

● Diskin etrafında engelleme bölgesi yoksa, engelleme bölgesinin sıfır olduğunu düşünün.

 

● Kan agarında, inhibisyon bölgesi agarın üst yüzeyinden ölçülür ve Petri plakasının kapağını çıkararak yapılır.

İnhibisyon Bölgesini Etkileyen Faktörler

PH

Ortamın pH değeri, antibiyotik aktivitesini etkileyebilir ve bu nedenle inhibisyon bölgesinin boyutunu değiştirebilir. İdeal olarak, ortamın pH değeri 7.2 - 7.4 arasında tutulur. PH çok düşükse makrolidler, kinolonlar ve aminoglikozidler gibi bazı ilaçlar potensiyelerini kaybeder, buna karşın tetrasiklinler gibi diğer ilaçlar daha yüksek aktivite gösterir. Daha yüksek bir pH'da, bu ilaçlar tam tersi özellikler gösterir.

Bakteri yoğunluğu

Düşük yoğunluklu agar üzerinde çim büyümesinin oluşumuna yol açmayacağı ve yüksek yoğunluklu inhibisyon zonunun düzgün gelişmesine izin vermeyeceği için organizmanın belirli bir yoğunluğu korunması gerekiyor. Kullanılan bakteri yoğunluğu 106 hücre civarındadır.

Nem

İyi tanımlanmış bir inhibisyon zonunu elde edebilmek için ortamın yüzeyinde veya kapağında fazla nemin bulunmadığından emin olunması gerekir.

Ortamın Bileşenleri

Ortamın timin, sulfonamid veya timidin gibi belirli bileşenleri, trimetoprim gibi antibiyotiklerin aktivitesini inhibe edebilir ve yanlış sonuçlar verebilir. Bu nedenle, Mueller-Hinton agar reçete edilen ortamdır. Bu ortamın düşük timin, sülfonamid ve timidin içeriği vardır. Bu besiyeri ayrıca nişastayı içerir - bakteri için bir karbon kaynağı olarak görev yapar ve organizma tarafından üretilebilecek toksik metabolitleri emer.
Not: Genellikle, bir tabakta birden fazla antibiyotik kullanılabilir. Bununla birlikte, iki antibiyotik inhibisyon zonu birleşiyorsa, okumalar dikkate alınmamalı ve deney tekrar edilmelidir.

Kaynak: http://www.buzzle.com/articles/what-does-zone-of-inhibition-mean.html

Çeviren ve Derleyen : Yavuz AYDIN

---