Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

DONDURMA YÖNTEMİ

---

Bu yöntem zaman geçirmeden hemen sonuç alınması gereken durumlarda örneğin hastanelerde teşhis amacı ile tümör olduğundan şüphe edilen dokularda acele kesit alınmasında ve dokudaki yağ enzim ve bazı radyo izotopların kayba uğramadan araştırılması istendiğinde kullanılır.
Dondurma yönteminin uygulanması sırasında basit dondurma mikrotomu kullanılır.
Dondurma ya sıvı karbondioksit ile yada freon 12 gazı ile yapılır.
Bu yöntemin bir kusuru dondurma ve   kesme işlevi sırasında çok azda olsa biçim değişikliklerinin oluşumudur.
Kesilecek materyalin dondurulması ve kesit alınması
Tabla büyüklüğünü aşmayan bir filtre kağıdı kesilip su ile ıslatılır ve tabla üzerine konularak hafifçe dondurulur kesilecek doku, bisturi ile istenen büyüklükte  küp yada dikdörtgen biçiminde yontulup tabla üzerine konulur, fanus kapatılır ve dondurulma işlemine başlanır.
Kısa aralarla CO2 verilip dondurma işlemi gerçekleştirilir. Parça iyice donduktan sonra yüzeyini düzleştirmek için birkaç kalın kesit alınır, düzgün yüzey elde edildikten sonra dokudan 15-20 mikron kalınlığında kesitler alınır.
Teşhis amacı ile  30 mikron kalınlığındaki kesitler uygundur.
Biyolojik amaçlar için 15-20 mikronluk kesitler alınır.
Eğer kesitler bıçak altında parçalanıp dağılıyorsa parça iyi donmamış demektir ve birkaç saniye için CO2 verilmesi gerekir.
Eğer kesitler yuvarlanıyorsa kısa bir an CO2 verilmesi yeterlidir.
Hafifçe kıvrılarak gelen kesitler en uygun olanlarıdır.
Kesitler ince bir resim fırçası yardımı ile tek tek alınıp küçük bir petri kutusundaki saf su içinde biriktirilirler.
Kesitlerin boyanması parafin kesitler gibi yapılır.
Dondurma kesiti temiz bir lam üzerine alınır ve suyun fazlası kesite fazla yaklaşılmadan  üçgen biçimindeki filtre kağıdı ile alınır.
Kesitin her tarafı örtülene kadar  boyadan bir kaç damla damlatılır.
1-2  dakika tutulduktan sonra kesitler yine lam üzerinde saf su ile çalkalanır. Böylece boyanın fazlası kesitten çıkarılmış olur.
Bu türlü boyanmış dondurma kesitleri reçineli bir ortamda kapatılamaz. O nedenle kesitler gliserin jelle kapatılır.

---