E.coli Bakterisinden Plazmit DNA İzolasyonu
16 saat inkübe edilmiş besi kültüründen eppendorf tüplere 1,5ml alınarak 12000 devir/dk 3 dakika (J.P. Selecta) bakteri hücrelerinin çöktürülmesi sağlanmıştır. Çöktürülen kısım üzerine 100μl solüsyon I: (50 mM glikoz, 25 mM Tris.HCl (pH 8.0)) ve 10 mM EDTA (RNase içeren) eklenerek 2 dakika buz üzerinde bekletilmiştir. Bunu takiben 200μl solüsyon II: (0.2 N NaOH, 1% SDS) eklenerek 1 dakika oda sıcaklığında bekletilmiştir. 350μl solüsyon III: (3M Potasyum Asetat (pH 5.2)) eklenerek tekrar oda sıcaklığında 1 dakika bekletilmiş ve 12000 devir/dk 5 dakika santrifüj edilerek supernatant kısmı yeni bir tüpe transfer edilmiştir. 500μl yıkama solüsyonu eklenerek 10000 devir/dk 30 saniye santrifüj edilmiştir. Yıkama solüsyonunun tamamen uzaklaştırılması için santrifüj işlemi tekrarlanıp yeni tüpe transfer edilen kısım üzerine 500μl Elution buffer eklenerek oda sıcaklığında 2 dakika bekletilmiştir. Son işlem olarak 12000 devir/dk 2 dakika santrifüj edilerek DNA alınmış ve -20oC’de saklanmıştır. Ayrıca plazmit DNA izolasyonu (BIO BASIC INC.) hazır kit kullanarak firmanın önermiş olduğu yol takip edilerek yapılmıştır.
Genetik
-
İnsanlarda Kaç Kromozom Vardır?
-
Sık görülen mikrodelesyon sendromları nelerdir?
-
Bilim insanları kromozomları nasıl inceler?
-
Arkea'da Kromozomlar ve DNA Replikasyonu
-
DNA Onarım Mekanizmaları Nelerdir?
-
DNA hasarına neden olan etkenler nelerdir?
-
XYY Süper Erkek Sendromu - JACOB’S, Sendromu
-
Bitki doku kültürü çalışmaları ile haploid bitkiler elde edilebilir
-
Gram pozitif bakterilerden genomik DNA izolasyon protokolü
-
E. coli bakterisinden genomik DNA izolasyon protokolü
-
DNA’nın Keşfi
-
İnsan Genom Projesi Nedir ? Amaçları Nelerdir ?
-
Genomik mikrodizilimlerle ikilenme teşhisi yöntemi
-
Gen duplikasyonu ve amplifikasyonu nedir?
-
DNA ile RNA Arasndaki Farklar ve Benzerlikler Nelerdir