Total lipid tayini

Kan lipdleri suda çözünmeyip, aseton, eter, kloroform ve benzen gibi polar olmayan organik çözücülerde çözünen ancak suda çözünemeyen heterojen yapılı biyomoleküllerdir. Lipidler tüm canlılarda bulunur, çünkü bu hayatın devamlılığı için gereklidir. Lipidler katı yağları, mumları ve onlarla ilişkili bileşikleri kapsarlar. Organizmanın önemli yapı maddelerinden biri olan lipitler C, H ve O atomlarından oluşmuşlardır. Bazı lipitlerde P, N ve S atomları da bulunmaktadır.

Vücutta genellikle ya membran lipidleri ve yağ hücrelerinde trigliserit olarak bulunurlar, ya da lipoprotein partikülleri olarak proteinler ile birlikte plazmada taşınırlar.

Diyetle alınan yağın % 98'i trigliserid, geriye kalanı ise fosfolipid, kolesterol, kolesterol esteri, serbest yağ asidleri, yağda eriyen vitaminler, steroidler ve terpenlerdir.

Lipitlerin önemi nedir ?

(1) Enerji eldesinde kullanılırlar.

(2) Yağda çözünen vitaminlerin (A,D,E,K) barsaklarda emilmesini kolaylaştırırlar.

(3) Hücre zarının yapısına katılırlar.

(4) Isı kaybını önlerler.

(5) İç organları çevreleyerek, onları basınç ve darbe gibi dış etkenlerden korurlar.

Total lipid tayininde kullanılan iki metot vardır:

-Sulfo vanilik asit metodu

-Kunkel fenol metodu

Modifiye Fosfovanilin Metodu İle Kanda Total Lipit Tayini

Deneyin prensibi: Serumun derişik sülfürik asit ile ısıtılıp, üzerine fosfovanilin çözeltisi ilave edilmesi sonucu serum lipitlerinin miktarı ile orantılı olarak gül kırmızısı rengi oluşturması esasına dayanmaktadır.

Deneyin yapılışı:

(1) Üç tane deney tüpü alınır ve aşağıdaki tabloya göre ilaveler yapılır.

Çözeltiler (uL) Kör Standart Örnek

Distile su 20 - -

Std. Kolesterol - 20 -

Serum - - 20

dH2SO4 200 200 200

Ağzı kapatılan tüpler kaynar su banyosunda 10 dk bekletilir.

Tüpler 5 dk akar su altında soğutulur.

Fosfovanilin (mL) 10 10 10

Tüpler 37 oC su banyosunda 15 dk bekletilir.

540 nm’de absorbans değerleri ölçülür.

(2) Elde edilen sonuçların aşağıdaki formülde yerine yazılması ile serumda bulunan % mg total miktarı hesaplanır.

% mg total lipit = (Örnek OD / Standart OD) x 800

Çözeltiler

Vanilin çözeltisi: 0.6 g vanilinin 100 mL distile suda su banyosunda ısıtılması ile hazırlanır.

Fosfovanilin çözeltisi: 25 mL vanilin çözeltisi, 5 mL distile su ve 60 mL ortofosforik asitin karıştırılması ile hazırlanır.

Standart kolesterol: 0.08 g kolesterol 10 mL etil alkolde su banyosunda hafifçe ısıtılarak çözülür.

Kunkel Fenol Deneyi

PRENSİP: NaCl nin fenol eriyiği ile serumun karıştırılması, β-lipoproteinlerin bir kısmının kaba parçalı çökelekler oluşturmasına neden olur. Bu veriye dayanılarak alınan numune içerisinde lipid tayini yapılır.

MATERYAL:

1.Deney tüpü

2.Pipet

3.Serum

4.Kunkel fenol reaktifi (Fenol + NaCl)

DENEYİN YAPILISI:

1. Bir deney tüpü alınarak içerisine 3,5 ml kunkel fenol reaktifi konur.

2. Üzerine pipetle alımış olan 0,2 ml serum ilave edilir.

3. Tüp iyice çalkalanır.

4. 30 dakika beklemeye bır

Kaynak:

https://acikders.ankara.edu.tr/pluginfile.php/4491/mod_resource/content/0/8.%20Hafta.pdf

http://tibbihizmetler.mu.edu.tr/Newfiles/69/dokuman/l3_pdf.pdf

https://www.erbakan.edu.tr/storage/images/department/meramtip/2016-2017%20ders%20program%C4%B1/ogrencifoy/ATT00335.pdf

#total #lipid #tayini