Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

GÜMÜŞ ÇÖKTÜRME YÖNTEMLERİ

---

Altın ve gümüş tuzlarının kullanıldığı yüzlerce teknik vardır. Bu teknikleri ilk kez Ramon y Cajal kullanmıştır. Camillo Golgi (1843-1926) ve Santiago Ramon y Cajal (1852-1934) ın geliştirdikleri teknikler önem taşır. Bu araştırıcılar sinir doku gösterimi üzerine çalışmalarından dolayı 1906 Nobel ödülünü paylaşmışlardır. Bu yöntemler özellikle glial elementlerin gösterimi için uygundur. Her iki araştırıcı da sinir sistemi çalışmaları için bilimde çok önemli yer tutar. Golgi günümüzde hala sinir hücreleri ve fibrilleri için çok kullanılan birçok boya geliştirmiştir. Tekniğinde aldehit-osmiyum-dikromat çözeltisini fiksatif olarak kullanmıştır. Ardından gümüş tuzları ile impegne etmiştir. Perikaryonlar altın rengi uzantıları siyah olarak gösterilebilir. Nöral dokuların şekillerini ve bağlantılarını ortaya koymuşlardır. Gümüşleme ile nöronlar ve glial hücreler gösterilebilir. Ramon y Cajal tekniğinde gümüş çöktürüldüğünde nöronlar sarı/turuncu renkte, nörofibriller kahverengi-siyah arası, nöroglialar ise siyah olur. Gümüşlemede sadece nöroglialar siyahlaşır.
Metalik çöktürme teknikleri, sinir hücre uzantıları ve retiküler fibrillerin gösteriminde standart bir yöntemdir. Metalik çöktürme ile gösterim, dokulardaki indirgeyici ajanlar yeterli güçte ise tek basamaklı bir tekniktir. Fakat fibrillerin çöktürme ile gösteriminde argirofil hücrelere benzer olarak genellikle 2 basamaklı indirgenme olur. Gümüş yerine altın da kullanılabilir.
Bazı metalik bileşikler dokular tarafından opak, genellikle siyah birikinti oluşturarak metalik duruma indirgenebilirler. Kolayca indirgendiğinden ve depo edilmiş gümüş stabil olduğundan Ag(NH3)2OH çözeltileri histoloji için çok uygundur. Melanin gibi tirozin türevleri ve intestinal bezlerin Kultschitzky hücrelerinde bulunan fenolik bileşikler Ag(NH3)2OH’ ı görülebilen birikim oluşturarak indirgerler. Bu tip hücreler arjentaffin hücreler olarak bilinir. Ag(NH3)2OH’ı direkt olarak indirgeyemeyen fakat dışarıdan eklenen bir indirgeyici ajanla gerçekleştiren hücreler argirofil hücreler olarak bilinir.

1-Golgi Teknikleri: Golgi çöktürmeler boya değildir. Bu teknikle tüm hücre gövdesi ve dendritler izlenebilir. Miyelinli aksonlar tuzları biriktirmezler. Miyelinsiz yapılar olan terminal son düğmecikler tuzlarla dolabilir. Uzun (bazıları birkaç ay) ve karmaşık yöntemlerdir. Sinir hücre ve uzantılarını dens siyah bir impregnasyonla gösterirler. Hücre iç yapısı kararırken, aksonlar ise genellikle sadece miyelin tabakası olmadığında impregne olurlar. Golgi' nin 3 yöntemi bilinmektedir. Hızlı, yavaş ve karışık olmak üzere
Yavaş Teknik:Küçük organ parçaları Müller çözeltisine veya % 3-5 kaliumbikromat çözeltisine atılır. Karanlıkta veya kahverengi bir şişe içerisinde 4-6 hafta saklanır. Bu süre sonunda deneme için bir parça alınır. Süzgeç kağıdı ile kurutularak % 0,75 ‘lik gümüş nitrat çözeltisinde 24 saat bırakılır. Hafifçe bistüri ile çok ince bir kaç kesit lama alınır, mikroskopta bakılır. Gümüş empregnasyonu (çökme) görülmezse kaliumbikromat çözeltisine bırakılır. Görülürse % 40’ lık alkol içerisinde yıkanır (1-2 saatte bir alkol yenilenir). Ardından % 80 ve % 90'lık alkollerden geçirilir. Absolu alkolde 12 saat bırakıldıktan sonra yarı yarıya eter- alkol çözeltisine aktarılır.
1 gün % 2 celloidin
1 gün % 4 celloidin
1 gün % 8 celloidin
% 8 celloidin ile bloklanır. Bloklar %96’ lık alkolde saklanır. Alınan kesitler yine % 96’ lık etil alkol içine alınarak ardından absolu alkolden geçirilir. Karbolksild konarak kapatılır.
Hızlı Teknik:Çok ince ve taze parçalar tercih edilir.
Golgi Çözeltisi
% 1’lik osmiyum acid 10cc
% 2,5 -3,5 kalium bikromat 40cc
2-3 mm kalınlığındaki 5-10 mm genişliğindeki doku parçaları dibinde cam boncuk bulunan kahverengi şişe içindeki Golgi çözeltisine aktarılır. 50 cc’lik Golgi çözeltisine bu büyüklükteki 6 parça konabilir. Parçaların çözelti içinde ne kadar kalacağı önceden söylenemez. Süre parçaya göre değişir. Onun için aynı yerlerden birkaç parça alıp atmalı ve zaman zaman (2-7 güne kadar) parçalar çıkarılarak papier buharla kurutulmalıdır. Parçalar % 0.75’ lik gümüş nitrat çözeltisine aktarılırak 1-2 gün bırakılır ( 48 saat ). Çözelti sararırsa veya bulanırsa yenilenmesi gerekir. % 40’ lık etil alkol içinde 1-2 saat yıkanır. Alkol sık sık yenilenmelidir. % 80–90 ve absolü alkollerden geçirilerek yarı yarıya eter-alkol eriyiğinde 1 gün ; % 2’ lik celloidinde 1 gün, % 4’lik celloidinde 1 gün bırakılır. % 8’lik celloidinde saklanır. Kesitler alınarak %96’lık etil alkol içine alınır. Ardından absolü alkolden geçirilerek karboliksilde konur kapatılır.

---