EHRLICH - ZIEHL-NEELSEN BOYAMA YÖNTEMI - Mikrobiyoloji Laboratuvarı

EHRLICH - ZIEHL-NEELSEN BOYAMA YÖNTEMI

Mycobacterium'ların hücre çeperinde bol miktarda uzun zincirli yağ asitleri vardır. Bunlar geleneksel boyama yöntemleri ile boyanmazlar. Boyayı alabilmeleri için alttan ısı tatbiki gerekir. Boya içeri girdikten ve preparat soğuduktan sonra yapılan dekolarizasyonda porlar daraldığı için boyayı bırakmaz. Dikkat edilmesi gereken hususlar vardır. Preparatın üzeri tamamen boya ile dolu olmalıdır. Isıtma sırasında kaynatmamaya özen gösterilmelidir. İşlem bittikten sonra preparat soğumadan boya dökülmemelidir. Preparat soğuduktan sonra boya dökülür ve dekolarizasyona geçilir. Preparatta kırmızılık kalmayıncaya kadar dekolarizasyona devam edilir. Daha sonra metilen mavisi (renk körlüğü olanlarda malaşit yeşili kullanılılarak) boyama sonlandırılır. Aside rezistan basiller (ARB) i gözleyebilmek için preparatın çok iyi incelenmesi gerekir. En az 10 dk bakılmalıdır. 1-2 basil şüpheli kabul edilir ve örnek tekrar edilir.Aside dirençli bakteriler diğer boyama yöntemleri ile kolay boyanmazlar.Boyanmalari için fenollü ve yogun boya eriyiklerinin uzun süre yada sicaklik etkisi ile uygulanmasi gerekir.Bu sekilde boyanan bakteriler bir kez boyandiktan sonra asit, asitli alkol ve diger renk gidericilerle boyalarini birakmazlar. Aside dirençli bakterilerin hücre yapisinda diger bakterilere göre çok fazla lipid bulunur. Fenollü fuksin boyasi lipid ortamda, alkol ve su ortamina göre daha kolay eridiginden bakteri lipidlerini kolayca geçer ve bakteriyi boyar. Renksizlestirici(asit+alkol) den bakteri aldigi boyayi birakmaz.

1. Preparat hazirlanir, kurutulur ve tespit edilir.

2. Preparat üzerine fenollü bazik fuksin dökülür, kaynamayacak sekilde 2 dakika isitilir.

3. Preparat su ile yikanir.

4. Preparat asit ve alkol içinde 1 dakika renksizlestirme yapilir.

5. Preparat su ile yikanir.

6. Preparat metilen mavisi ile 15 dakika muamele edilir.

7. Preparat su ile yikanir, kurutulur.

8. Preparat immersiyon obj. ile incelenir. Bu boyanma ile aside dirençli bakteriler koyu parlak kirmizi renkte boyanir. Zemini olusturan hücreler ve diger bakteriler mavi renkte boyanir. EZN’den baska Konrich boyama, Kinyoun’un boyama yöntemi, Auramin – fenol boyama yöntemi, Auramin – Rhodaminli boyama yöntemi ve Glikerson ve kanner’in Floresanli boyama yöntemleri vardir.

#ehrlich #ziehl-neelsen #boyama #yöntemi