E.coli’de CaCl2 ile Gen Transferi
Kalsiyum klorür ile gen transferi Mandel ve Higa, 1970 metodu kullanılarak yapılmıştır. 16 saat 37oC’de LB besi yerinde büyütülmüş E.coli DH5α veya EC1000 suşları %2 olacak şekilde 50ml LB besi yerine 250ml’lik cam şişe içerisine ekilmiştir. Hücreler OD600=0.350 kadar büyütüldükten sonra 10 dakika buzda bekletilerek 4oC’de 15 dakika santrifüj yoluyla hasat edilmiştir. Süpernatant kısmı dökülerek pelet kısmı 10ml soğuk 100mM CaCl2’de çözdürülmüş ve 30 dakika buzda bekletilmiştir. CaCl2’de çözdürdüğümüz pelet 4oC’de 3500 devir/dk 15 dakika santrifüj edilmiştir ve oluşan sıvı kısmı dökülmüş, pelet bu kez 1ml soğuk 100mM CaCl2’de 2 saat buzda bekletilmiştir. Aktarılacak plazmit hücrelere eklenerek sıcak şokla 42,5oC’de 2,5 dakika su banyosunda bekletilmiştir. Sıcaklık şokuna uğramış hücrelere 800μl LB besi ortamından eklenerek 37oC’de 1,5 saat inkübe edilmiştir. Büyüyen bakteriler içerisinde seçici antibiyotik (eritromisin) ve Xgal bulunan katı LB besi yerine ekim yapılarak 37oC’de 16 saat inkübe edilmiştir. Seçici besiyerinden alınan koloniler PCR ile test edilerek transformant koloniler tespit edilmiştir
Genetik
-
İnsanlarda Kaç Kromozom Vardır?
-
Sık görülen mikrodelesyon sendromları nelerdir?
-
Bilim insanları kromozomları nasıl inceler?
-
Arkea'da Kromozomlar ve DNA Replikasyonu
-
DNA Onarım Mekanizmaları Nelerdir?
-
DNA hasarına neden olan etkenler nelerdir?
-
XYY Süper Erkek Sendromu - JACOB’S, Sendromu
-
Bitki doku kültürü çalışmaları ile haploid bitkiler elde edilebilir
-
Gram pozitif bakterilerden genomik DNA izolasyon protokolü
-
E. coli bakterisinden genomik DNA izolasyon protokolü
-
DNA’nın Keşfi
-
İnsan Genom Projesi Nedir ? Amaçları Nelerdir ?
-
Genomik mikrodizilimlerle ikilenme teşhisi yöntemi
-
Gen duplikasyonu ve amplifikasyonu nedir?
-
DNA ile RNA Arasndaki Farklar ve Benzerlikler Nelerdir