Çiftli Geçiş Sistemi ve pORI plazmit sistemi
Plazmit vektörler kullanılarak klonlanmış genler kromozoma entegre edilebilir ve kromozomdan hedef gen mutasyona uğratılabilir. pORI plazmit sistemi kromozom üzerinden gen mutasyonunda kullanılan sistemdir. pORI plazmitleri replikasyonunu başlatacak repA genini içermemektedir (Leenhouts ve ark., 1998). Dolayısıyla RepA proteini kromozomdan veya diğer bir yardımcı plazmitten (pVE6007) sağlandığı sürece replike olabilmekte, aksi durumda kromozoma entegre olmaktadır (Leenhouts ve ark., 1990). pVE6007 plazmiti sıcaklığa hassas RepA proteinini sentezlediğinden plazmit 30°C’ye kadar olan sıcaklıklarda replike olabilmektedir. Sıcaklığın 30oC’den 37oC’ye yükseltilmesi ile RepA replikasyonu önlenmektedir (Maguin ve ark., 1992). Sıcaklığa hassas plazmitin replikasyonunun sıcaklık değişiminden dolayı sonlanması, pORI plazmitine klonlanan hedef geni üst veya alt bölgelerden birinin yardımıyla kromozoma entegre olmaya mecbur bırakacaktır. pORI plazmitinin taşıdığı lacZ geni sayesinde tekli geçit (single cross over) sistemiyle bakteri X-gal bulunduğu ortamda mavi renkte görünecektir.
Bir ileriki safha olan çiftli geçiş sistem (double cross over) safhasında kromozoma entegre olan pORI plazmitine ait alt ve üst bölgeler kromozomda bulunan homologları ile eşleşerek lacZ, antibiyotik dirençli ve hedef genin kromozomdan koparılmasını sağlayacaktır. Çiftli geçiş sistemi sonucunda oluşacak beyaz renkli bakteri kolonileri ya başlangıç veya mutant formundadır ve antibiyotik dirençli geni ve LacZ enzimi içermemektedir. Mutant bakteriler PCR yöntemiyle başlangıç formundaki bakterilerden ayırt edilebilmektedir (Gasson ve ark., 1996).
Genetik
-
İnsanlarda Kaç Kromozom Vardır?
-
Sık görülen mikrodelesyon sendromları nelerdir?
-
Bilim insanları kromozomları nasıl inceler?
-
Arkea'da Kromozomlar ve DNA Replikasyonu
-
DNA Onarım Mekanizmaları Nelerdir?
-
DNA hasarına neden olan etkenler nelerdir?
-
XYY Süper Erkek Sendromu - JACOB’S, Sendromu
-
Bitki doku kültürü çalışmaları ile haploid bitkiler elde edilebilir
-
Gram pozitif bakterilerden genomik DNA izolasyon protokolü
-
E. coli bakterisinden genomik DNA izolasyon protokolü
-
DNA’nın Keşfi
-
İnsan Genom Projesi Nedir ? Amaçları Nelerdir ?
-
Genomik mikrodizilimlerle ikilenme teşhisi yöntemi
-
Gen duplikasyonu ve amplifikasyonu nedir?
-
DNA ile RNA Arasndaki Farklar ve Benzerlikler Nelerdir