Bitkilere Gen Aktarım Teknikleri
1. Agrobacterium aracılığıyla gen transferi
Günümüzde en fazla uygulanan tekniktir. Günümüzde, bitkilere gen aktarımında en yaygın olarak kullanılan araç Agrobacterium tumefaciens bakterisidir. Bu bakteri sayesinde hemen hemen tüm kültür bitki türlerinde transgenik bitkiler elde edilebilmiştir.
2. Doğrudan gen aktarım teknikleri
Agrobacteriuma dayalı gen aktarım sisteminin etkin bir biçimde kullanılamadığı bitki türlerine gen aktarım için çoğunlukla doğrudan gen aktarım yöntemleri kullanılmaktadır.
Doğrudan gen aktarım teknikleri arasında en yaygın olarak kullanılan yöntemler; kimyasal yöntem, elektroporasyon, mikro-enjeksiyon ve biyolistik (partikül tabancası veya bombardımanı)dır.
2.1 Biyolistik Gen Transferi (Partikül Tabancası ile Gen Aktarımı)
Partikül tabancasıyla, ağır metal partiküllerine (1-2 μm, altın veya tungsten) yapıştırılımış DNA parçalarının bitki hücre ve dokularına (yaprak, embriyo, sürgün ucu meristemi gibi organ kısımları), helyum gazı şokuyla bombardımanı yoluyla yapılmaktadır. A. tumefaciens aracılığıyla gen aktarımının zor olduğu birçok iki çenekli bitki türünde bu yolla transgenik bitkiler üretilebilmiştir .
Partikül bombardımanı metoduyla DNA parçası yerine doğrudan faj, bakteri veya maya hücreleri hedef dokuya transfer edilebilmektedir. Bu yolla yüksek moleküler DNA transfer edilebilir ve DNA izolasyonu ve saflaştırılması gibi zor işlemlerden sakınılabilir.
2.2 Protoplastlara Direk Gen transferi
Bu yöntemlerde, yüksek voltajlı elektrik akımı veya kimyasal maddelerle protoplast zarında DNA moleküllerinin geçebileceği büyüklükte (30 nm) geçici gözenekler oluşturulur ve yabancı genleri taşıyan DNA parçasının hücre içerisine girmesi sağlanır.
2.3 Mikro enjeksiyon
Bitkiye aktarılması istenen genleri taşıyan DNA parçası çok ince (0.5-10 μm çapında) kılcal pipetlerle veya enjektörlerle doğrudan immobilize edilmiş hedef hücrelere, kallus, meristem, mikrospor vb. içerisine steril şartlarda mikroskop altında enjekte edilir. Mikroenjeksiyon için protoplastlar poly-L-lysine üzerine yapıştırılarak veya agarose içerisine gömülerek sabit hale getirilirler.
3.Diğer gen transferi teknikleri
3.1 Sonikasyon
Ses dalgalarının hücreler arası ve hücre zarında boşluklar açarak serbest DNA parçalarının hücre içine girişini sağlamak esasına dayanan bu metot bazı durumlarda elektroporasyondan daha iyi sonuçlar vermiştir.
3.2 Desikasyon
Dokuların önce soldurulup, daha sonra aktarılmak istenen DNA.nın da bulunduğu bir ortamda
tekrar su alımı sonucu, DNA.nın hücre içerisine alınması tekniğine dayanan basit bir yöntemdir.
3.3. Lazer mikro ışınlarıyla transformasyon
UV lazer mikro ışınları (343 nm) ile hücrelerde mikro delikler açmak ve DNA parçalarının içeriye girmesini sağlamak amacıyla yapılmaktadır.
3.4 Fiberler aracılığıyla transformasyon
Fiberlerle kaplanmış DNA, süspansiyon hücrelerine gen aktarımında kullanılmıştır. Fiberler hücrelerde çok ince delikler açmakta ve DNA içeriye kolayca girebilmektedir.
3.5 Polen transformasyonu
Çimlenmekte olan polenlerin DNA ile muamele edilmesi yoluyla yapılan gen aktarım metodudur.
-KESİNLİKLE ALINTIDIR-
Genel Biyoloji
-
Protista Alemi ve Genel Özellikleri
-
Hücrelerdeki farklı ve benzer yapılar
-
Ses Nedir ? Ses Nasıl Oluşur?
-
Kültürü Yapılan Fitoplankton Türleri Nelerdir?
-
Apoptoz: Programlı Hücre Ölümü Nedir?
-
Ribozom ve Protein Sentezi
-
Mikrotübüller ve İplikçikler
-
Hücre Zarları
-
Lipid Çift-Katmanın Keşfi
-
Biyoreaktör
-
Telomerler ve İnsan Telomerinin Kristalik Yapısı
-
Hücre Biyolojisinin Tarihsel Gelişimi
-
Hücre biyolojisi nedir ?
-
Biyolojik Çeşitlilik Nedir ?
-
Sinir Sistemi Yapısında Bulunan Hücre Tipleri ve Özellikleri Nelerdir?