APOPTOTİK HÜCRELERİN İMMÜNOFLORESANS GÖSTERİMİ - TUNNEL YÖNTEMİ
TUNNEL YÖNTEMİ
Roche Marka Apoptotik Kit
1.Deparafinizasyon ve rehidrasyon standart prosedürle uygulanır (Kesitler 60 derecede 1 gece bekletilir. Ksilolde 1 saat, absolü ve azalan konsatrasyonlarda alkol (%100, 96, 90, 80, 70 ve bi distile su serileri) den geçirilip PBS de yıkanır.
2. Kesitler 15-30 dakika (30 dakika) 21-37 C de Proteinaz K ile inkübe edilir.
3. Kesitler 2 kez PBS de yıkanır.
4. Pozitif kontroller DNazI de 10 dakika 15-25 C de inkübe edilir.
5. Negatifler Label ile 37 C de 60 dakika inkübe edilirken (etüvde), pozitif kontroller TUNEL reaksiyon karışımı ile 37 C de 60 dakika inkübe edilir.
6. Kesitler 3 kez PBS de yıkanır.
7. Örneğin (negatif ve pozitif) çevresindeki alan kurulanır. 50 μl converter POD kesitlerin üzerine konur. 37 C de 30 dakika etüvde inkübe edilir.
8. PBS de 3 kez yıkanır.
9. 50 μl DAB substratı kesitlere konur. 15-25 C de 10 dakika inkübe edilir.
10. PBS de 3 kez yıkanır.
11. Kapatılır ve incelenir.
TUNEL REAKSİYON KARIŞIMININ HAZIRLANMASI
Vial 1 (Enzim çözeltisi) ve Vial 2 (Label çözeltisi) 10 örneği boyamak için yeterlidir.
TUNEL REAKSİYON karışımı kullanmadan hemen önce hazırlanmalıdır. Karışım kullanılana kadar buz üzerinde kalmalıdır.
1. Vial (2) (Menekşe) den 100 μl alınır. Bu 2 negatif kontrol için kullanılan label çözeltisidir.
2. Vial (1) (Mavi) 50 μl enzim çözeltisi 450 μl kalan label çözeltisi (Vial 2) üzerine eklenir. Toplam 500 μl TUNEL REAKSİYON karışımı hazırlanmış olur. Karışım iyice karıştırılır.
Tunnel reaksiyon karışımı kullanılana kadar buz üzerinde tutulur.
Histoloji
-
Endosülfan ve okratoksin-A’nın birlikte sıçanlarda toksisitesi: histopatolojik değişiklikleri
-
Histoloji Pdf Ders Notları
-
DEKALSİFİYE EDİLMEMİŞ KESİTLERİN HAZIRLANIŞI
-
DEKALSİFİKASYONU TEST ETMEK
-
KELATLAMA AJANLARI
-
ELEKTROLİTİK DEKALSİFİKASYON
-
ASİT DEKALSİFİKASYON SIVILARI
-
Histopatoloji nedir ?
-
KEMİK DOKUSU VE DEKALSİFİKASYON
-
MSS’DE DEJENERE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
MARKSCHE’DEN BOYASI (Spielmayer, Benda)
-
MSS‘DE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
KARIŞIK OLAN TEKNİK
-
BİELSCHOWSKY TEKNİĞİ
-
GÜMÜŞ ÇÖKTÜRME YÖNTEMLERİ