PRİMER HÜCRE KÜLTÜRLERİ
Doğrudan dokudan elde edilen hücre kültürlerine primer hücre kültürleri denir. Primer kültürler elde edildildikleri dokunun özelliklerini taşırlar. Genellikle heterojen bir yapı gösterirler, hücre hatları gibi tek tip hücreler değillerdir.
Primer hücre kültürleri küçük doku parçalarının petri yüzeylerine ekilmesiyle eksplant kültürler halinde ya da enzimatik uygulanmasıyla tek hücre süspansiyonu halinde yapılabilir.
Laboratuarımızda çoğunlukla kulak dokusundan fibroblast ve kıkırdak primer kültürleri yapılmaktadır.
Primer kültürler kontaminasyon riski olan kültürlerdir, bu yüzden manipulasyonlarda steriliteye özen gösterilmelidir. Kullanılan cerrahi malzemeler otoklavlanmış olmalıdır. Tüm manipulasyonlar laminar kabin içinde yapılmalıdır.
Primer mezanşimal (kıkırdak, fibroblast) hücre kültürü
1) Kulak %70 alkol ile temizlenmeli ve alkol ile iyice temizlenmiş kulak pensi ile doku alınmalıdır. Hayvandan alınan dokular, + 4 derecede %5 antibiyotik içeren PBS solüsyonunda işleneceği laboratuara gelene kadar saklanır. Dokuların alınması sırasında steriliteye özen gösterilmelidir. Bu şekilde muhafaza edilen doku örnekleri 3-4 gün canlılığını muhafaza edebilir.
2) Laboratuara ulaşan doku örnekleri laminar kabin içinde %5 antibiyotikli PBS’den %2 antibiyotikli PBS içerisine aktarılırlar. Kulak doku parçalarının üzerindeki kıllı deri bisturi ucu yardımı ile temizlenir, kıkırdak ve bağ dokusu temiz bir petriye aktarılır ve kurumaması için üzerine az miktarda PBS damlatılır.
3) Steril bistüri ve pensler ile dokular iğne başı kadar küçük parçalara ayrılır. Bu parçalar 35 mm’lik hücre kültür petrilerine aktarılır. Dokuların kültür petrisine yapışması için bir süre (2-3 dakika) beklenir.
4) Hücre kültür medyumu petrinin kenarından yavaş bir şekilde dokuların üzerini kaplayacak şekilde uygulanır.
5) Ekim yapılan kültür petrileri inkübatöre yavaşca kaldırılır. Petriyi sarsmamaya özen gösterilmelidir aksi takdirde ekilen dokuların yerlerinden kalkma olasılığı vardır.
6) Petriler her gün dışarıdan kontrol edilir. Eğer petrilerde kontaminasyon tespit edilirse, kontamine petri % 70 alkolle kaplanır ve tıbbi atık olarak bertaraf edilir. (Kontaminasyon: medyum renginin sarıya dönmesi, bulanıklaşması, tortu oluşması)
7) Ekimi takiben 7 gün boyunca petriler yerlerinden oynatılmadan kültüre edilmelidirler. 7. günde petriler invert mikroskop altında kontrol edilir ve hücre üremesi olanlar tespit edilir. İlk olarak primer kültür petrilerinin medyumu 7. günde tazelenir ve 2 gün ara ile medyum değişimleri tekrarlanmalıdır. Hücrelerin petriyi kaplamasının ardından; doku parçaları pastör pipeti ile toplanır ve petrilere tripsin uygulanır ve hücreler pasajlanır.
Eğer hücreler hemen kullanılmayacaksa dondurma işlemi gerçekleştirilir.
Mikrobiyoloji
-
Antibiyotiklerin Etki Mekanizmaları Nelerdir?
-
Azot oksit
-
Petri Kutusunda Agarlı Besiyeri Hazırlanması
-
Tüpde Agarlı Besiyerlerinin Hazırlanması
-
Besiyeri Hazırlarken Dikkat Edilecek Hususlar Nelerdir ?
-
Dehidre Besiyerleri Nedir?
-
Besiyerinin Sahip Olması Gereken Özellikler
-
Besiyeri hazırlanmasında kullanılan maddeler nelerdir ?
-
Besiyerlerin Sınıflandırılması Nasıl Yapılır ?
-
Besiyerinin Tanımı ve Kullanım Amaçları Nelerdir ?
-
Pseudomonas Cinsine ait Türler
-
Veba - Yersinia Pestis
-
Tularemi - Francisella tularensis
-
Şarbon - Bacillus anthracis Enfeksiyonu
-
Bruselloz - Brucella spp