HEMATOKSİLEN & EOZİN BOYASI
Histolojide en çok kullanılan boyadır. Hematoksilen, bazik bir boya olarak kabul edilirse de kendisi boya değildir. Boya olabilmesi için zincirlerinden birinde bulunan quioidin hemateine okside olması gerekir. Sulu bir çözelti içinde bir aydan fazla bir zamana gerekir. Oksidasyon, sodyum iyodat veya civa oksit eklenerek hızlandırılabilir. Fakat hemateinin ileri oksidasyonu ile boyama özelliği kaybolur.
Hematein, zayıf, anyonik kırmızımtrak-sarımsı bir boyadır. İzoelektrik noktası 6.5’ tur. Zayıf bir boyadır. Fakat mordant ile kullanılırsa koyu ve devamlı bir boya olur. Genellikle aliminyum ve demir tuzları (şapları) kullanılır. En çok kullanılan şaplar:
Potasyum alum: K2SO4Al2 (SO4)3. 24 H2O
Ammonium alum: (NH4)2SO4Al2(SO4)3.24 H2O
Demir alum: (NH4)2SO4Fe2(SO4)3.24 H2O
Aliminyum ve demirin verdiği mor renk farklıdır. Aliminyum, mavi-mor renk verir. Suda erir, dokuya temas ettikten sonra ne su ne de alkol onu tekrar çıkarabilir. Aliminyumla hematein bazik boya gibi etki eder. Demirli hematein ise siyah veya lacivert renk verir, fakat etkisi birincisi kadar basit değildir. Rutin teknikte, kesitler önce mordantlanır sonra hematein ile muamele edilir. Fazla mordant çözeltide differensiye edilir. Bu şartlar altında hematein bazik boya olarak etki eder.
Eozin, fluorescein’in tetrabroma türevidir. Asidik (anyonik) bir boyadır.
H&E boyama yöntemi ile hücre ve dokular aşağıdaki şekilde boyanır.
Çekirdek mavi-siyah-koyu mavi
Sitoplazma pembe
Eritrositler-kas kırmızı
Fibröz doku açık pembe
Kıkırdak açıktan koyu maviye kadar renk tonlarında
Mükoz salgı mavimtrak (metakromatik)
Kalsifiye doku koyu mavi
Protein çökelekleri pembe
Bakteri toplulukları koyu mavi
Çekirdeklerin mavi-siyah boyanmasının nedeni polianyonik DNA ‘dır ve bazik hematein-mordantla kuvvetli şekilde etkileşir. Kıkırdakların da mavi-siyah boyanmasının nedeni polianyonik glikozaminoglikanlardır. Sitoplazma pembe olarak ifade edilirse de mikroskopta mavimsi pembe olarak izlenir nedeni sitoplazmik RNA’ nın, hematein mordantla birleşmesidir.
1-HARRİS HEMATOKSİLENİ
Harris’s alum hematoksilen 5 g
Absolu alkol 50 cc
Aliminyum amonyum sülfat 100 g
Distile su 1000 cc
Civa oksit 2.5 g
Hematoksilen alkol içinde hafif ısıda eritilir. Aliminyum amonyum sülfatı da ısı yardımıyla distile su içinde eritilir. İkisi geniş bi r erlenmayerde karıştırılır. Hızla kaynatılır. Ateşten alınır. Kabarcıklar çıkarken civa oksit azar azar ilave edilir. Çözelti koyu mor renk alınca cam kap dıştan soğuk suya tutularak soğutulur. Boyamaya hazırdır. Fakat 2-3 gün kalsa daha olgunlaşır. Olgunlaşmış çözelti koyu renkli şişelere alınıp, ağzı sıkıca kapatılarak karanlık yerde saklanır. Boya kullanılacağı zaman % 4 oranında glasiyal asetik asit eklenir.
2-ERLİCH ASİT HEMATOKSİLENİ
Hematoksilen 6.4 g
Ammonium aliminyum sülfat 40 g
Etil alkol 322 cc
Gliserol 322 cc
Distile su 322 cc
25 0C’ de 6-8 hafta beklenir. Hemen olgunlaştırmak için 0.64 g sodyum iyodat eklenir.
3-ERLİCH HEMATOKSİLENİ
Hematoksilen 4 g
% 95’lik etil alkol 200 cc
Distile su 200 cc
Gliserin 200 cc
Amonyum veya potasyum alimunyum sülfat 6 g
Glasiyal asetik asit 20 cc
İki hafta veya daha fazla süre ışığa ve havayla karşı karşıya bırakılarak olgunlaştırılır. Hemen olgunlaştırmak için 0.6 g sodyum iyodat eklenir.
4-ERLİCH HEMATOKSİLENİ
Hematoksilen 80 g
% 95’lik etil alkol 2400 cc
Potasyum alum (Aliminyum potasyum sülfat) 240 g
Distile su 1200 cc
Gliserol 1200 cc
Glasiyal asetik asit 120 cc
Hematoksileni alkolde çözün. Alumu sıcak su içinde çözüp gliserolü ekleyin, soğumaya bırakın. Azar azar aluma hematoksileni ekleyerek karıştırın. Temiz bir kapta olgunlaşmaya bırakılır. Olgunlaşma 6-8 hafta sürer ve çözelti boyama özelliğini yıllarca korur. Hematoksilende 4-5 dakika boyanır.
5-WEİGERT HEMATOKSİLENİ
Çözelti A:Hematoksilen (1g)+Etil alkol (100 cc).....4 hafta olgunlaştırılır.
Çözelti B: % 30’ luk demir klorür-sulu (4cc)+HCl (1 cc)
Çözelti A ve B’ den eşit miktarda karıştırılıp 30 dakika içinde kullanılır. Hematoksilende 15-20 dakika boyanır.
6-HEİDENHEİN HEMATOKSİLENİ
Demir alum çözeltisi:Ammonium ferric sülfat (5 g)+ Distile su (100 cc)
Hematoksilen Çözeltisi:
Hematoksilen 0.5 g
Absolü alkol 10 cc
Distile su 90 cc
4 hafta olgunlaşmaya bırakılır.
Uygulama
1-Kesitler suya indirilir
2-Demir alumda 30 dakika-24 saat bırakılır
3-Akarsuda yıkama
4-Heidenhein hematoksilende 30 dakika-24 saat boyama
5-Suda çalkalama
6-Demir alumda 1-30 dakika mikroskopta kontrol edilerek differensiye edilir.
7-En az 10 dakika akarsuda yıkama
8-Karşıt boyalar Van Gieson ve modifiye şekilleridir.
7-CARAZZİ HEMATOKSİLENİ
Hematoksilen 0.5 g
Gliserol 100 cc
Alimunyum potasyum sülfat 25 g
Distile su 400 cc
Potasyum iyodat 0.1 g
Hematoksileni gliserol ile karıştırın. Isı kullanmadan distile suda potasyum aumu çözün. Çözünme uzun zaman alabilir. Hematoksilene alumu karıştırarak yavaş yavaş ekleyin. 10 cc suda potasyum iyodatı karıştırarak çözün. 4-6 ay boyunca çözelti boyanma özelliğini korur.
8-% 1’lik ALKOLİK EOZİN
Eozin Yelowish 10 g
Distile su 50 cc
% 95’ lik etil alkol 940 cc
Eozini distile suda eritin. Alkol eklenir. Bu eozin stok olarak saklanır ve eşit miktarda % 95’lik alkol eklenerek kullanılır.
9-% 0.5’lik SUDAKİ EOZİN
Eozin Yelowish 5 g
Distile su 1000 cc
Eozini distile suda eritin. Koyu ton istenirse her 100 cc’lik çözelti için 0.5 cc glacial asetik asit ilave edilir.
10-EOZİN
Eozin Yelowish 1 g
Distile su 100 cc
Thymol 1 küçük kristal
Histoloji
-
Endosülfan ve okratoksin-A’nın birlikte sıçanlarda toksisitesi: histopatolojik değişiklikleri
-
Histoloji Pdf Ders Notları
-
DEKALSİFİYE EDİLMEMİŞ KESİTLERİN HAZIRLANIŞI
-
DEKALSİFİKASYONU TEST ETMEK
-
KELATLAMA AJANLARI
-
ELEKTROLİTİK DEKALSİFİKASYON
-
ASİT DEKALSİFİKASYON SIVILARI
-
Histopatoloji nedir ?
-
KEMİK DOKUSU VE DEKALSİFİKASYON
-
MSS’DE DEJENERE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
MARKSCHE’DEN BOYASI (Spielmayer, Benda)
-
MSS‘DE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
KARIŞIK OLAN TEKNİK
-
BİELSCHOWSKY TEKNİĞİ
-
GÜMÜŞ ÇÖKTÜRME YÖNTEMLERİ