Gram Boyama
Ilk olarak Hans Christian Joachim Gram tarafindan bu boyama yöntemini uygulamis ve bakterilerin büyük çogunlugunun gram olumlu ve gram olumsuzluk boyanma özelligi gösterilmistir.
Gram olumluluk özelligi bakterilerin hücre çeper yapisina bagli bir özelliktir.Gr. olumlu bakterilerin peptidoglikan tabakasi gram olumsuzlara göre daha kalin,ayrica gram olumsuzlarda bulunmayan Teikoik asitin varligidir.Ayrica Gram olumlu bakterilerin hücre çeperlerinde magnezyum ribonükleat, lipid ve karbonhidratlar boya ile(Kristal moru) zor ayrilabilen bilesikler yapmasidir.
1. Preparat hazirlanir, kurutulur ve tespit edilir.
2. Preparat üzerine kristal viyole(Gentiana viyole) dökülür. 1 dakika bekletilir.
3. Preparat üzerindeki boya(Kr. vio.) dökülür.Gram iyot(Lugol) preparat üzerine ilave edilir, yaklasik 1 dakika tutulur.
4. Preparat %96 lik etil alkol ile 2-3 kez yikanir.
5. Preparat su ile yikanir
6. Preparat sulu fuksin boyasi ile 15 saniye boyanir.
7. Preparat su ile yikanir, kurutulur, immersiyon obj. ile incelem yapilir.Gram olumlu bakteriler MOR,Gram olumsuz bakteriler Pembe-Kirmizi renge boyanir. Gram boyama da sulu fuksin(zit boya) disinda kullanilan boyalar olarak; nötral kirmizisi, safranin sulu eriyigi, Bismark kahverengisi,asit pikrik eriyigi ve malasit yesili.Ayrica Gram boyama yönteminin, Weitgert’in, Hucker’in ve Brucke’nin degisik Gram boyama yöntemleri vardir.En az iki bazik boyanın kullanıldığı boyama yöntemidir. Mikroorganizmaların gram boyamasında etkili olacak mekanizmalar şunlardır:
1- Bakteri hücre yapısı:
a)- Gram pozitif bakterilerin hücre çeperinde Gram negatiflere kıyasla oldukça kalın peptidoglikan tabaka mevcuttur. Bu nedenle aldıkları boyayı alkolle dekolarizasyonda gram negatiflere nazaran daha geç bırakırlar.
b)- Gram pozitif bakterilerin hücre çeperinde karbonhidratlar, gram negatiflerde lipidler fazladır. Karbonhidratlar alkolle dekolarizasyon esnasında dehidratasyona (su molekülü açığa çıkar) uğrar. Porlar iyice büzüşür , daralır ve boya dışarı çıkamaz. Lipitler için ise alkol çözücüdür ve hücre çeperinde olan porlar daha çok açılacaktır.
c)- Gram pozitif hücre çeperinde bulunan teikoik asit, bazik boyalarla daha kuvvetli birleşik oluşmasını sağlar.
d)- Gram pozitif hücre çeperinde bulunan magnezyum ribonucleatın gram boyanmada önemli fonksiyonları vardır.
e)- Bakteri protoplazmasının pH sıda önemlidir.Gram pozitiflerdeki protoplazmanın pH sı daha asidiktir.
2- Bakteri Kültürünün Yaşı:Genel olarak yaşlanmış kültürden elde edilen preparat gramla negatif boyanma eğilimindedir. Gram boyamada kullanılan değişik boya çözeltileri vardır. Bu boyaların hazırlandığı çözeltiye göre boyama süresi değişir. ( Toz boya distile su içinde hazırlanırsa Kristal Viole ile boyama 1 dakika iken, amonyum oxalat kullanıldığında kristal viole ile boyamada 30 saniye yeterli olmaktadır.) Gram boyamada Lugol mordan olarak kullanılmaktadır. Görevi boyanın bakteriye tesbitini sağlamaktır.
Gram Boyama Yönteminin Yararları
1- Mikroorganizmaları gram pozitif ve gram negatif diye iki ana gruba ayırır.
2- Mikroorganizmaların morfolojisi ve dizilimi esas alınarak ön tanı konur. Buna dayanarak nisbeten uygun bir antibiyotik seçilir, izolasyon için uygun besiyeri seçimi yapılır.
3- Örneğin usulüne uygun olup olmadığı hakkında bilgi verir.
4- Anaerop mikroorganizma olup olmadığı hakkında bilgi verir. Aeroplarda üreme yok; fakat mikroskopta polimikrobiyal özellik gözleniyorsa anaerop olduğu anlaşılır.
Mikrobiyoloji Laboratuvarı
-
Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN) Boyama Yöntemi Nedir?
-
Mantarların Boyanması
-
Laktofenol Pamuk Mavisi Boya Solüsyonun Hazırlanışı
-
Flagella Boya Solüsyonun Hazırlanışı
-
Bakterilerde Kirpik Boyama İçin Preparat Hazırlanması
-
Spor Boyama Solüsyonlarının Hazırlanması
-
Schaffer Fulton Yöntemi ile Spor Boyama
-
Ehrlich – Ziehl – Neelson Boyamada Kullanılan Solüsyonlarının Hazırlanışı
-
EHRLICH - ZIEHL-NEELSEN BOYAMA YÖNTEMI
-
Besiyeri Hazırlamada Kullanılan Araç Gereçler Nelerdir?
-
Karbonhidrat Fermantasyon besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
TSİ (Üç şekerli Demirli Agar) besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Çikolata Agar Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Kanlı Agar Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Löwenstein- Jensen Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri